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AgTG2-
apresentam fortes sinais de seleção positiva, podendo estar envolvidos
no reconhecimento de organismos patogénicos, e por conseguinte envolvidos
numa resposta contra a infeção.
Por fim, este trabalho permitiu concluir que na Guiné Equatorial continental
existem as quatro espécies de
Plasmodium
, incluindo a espécie
P. vivax
que
até à data não estava descrita no país. Foi encontrada uma elevada
prevalência de mutações associadas à resistência à sulfadoxina-pirimetamina,
pelo que se recomenda uma contínua monitorização destas mutações. Por fim
constatou-se que os genes
AgTG1
e
AgTG2
apresentam fortes sinais de
seleção positiva, podendo estar envolvidos na resposta à infeção por
Plasmodium.
NETO, Zoraima Naymbi da Silva (2014) – Biological
characterization of de ubiquitylating enzymes (UBPs/UCHs) in
Plasmodium spp as potential drug targets Dissertação de
Doutoramentono ramo de Ciências Biomédicas, especialidade de
Parasitologia. IHMT. Lisboa.
A malária ainda constitui um grande problema de saúde pública e a resistência aos
antimaláricos ameaça todos os esforços efectuados com vista ao combate e controle
desta doença. Existe uma grande necessidade de se identificar novos compostos de
preferência que actuem em novos alvos terapêuticos. A via da
ubiquitinação/proteosoma já foi identificada como um alvo terapêutico interessante.
Mutações nas enzimas de des-ubiquitilação (DUBs) que catalizam a remoção da
ubiquitina estão associadas ao desenvolvimento de doenças infecciosas e não
infecciosas.
Neste projecto quatro DUBs foram identificadas no genoma do parasita
Plasmodium
falciparum
e foram caracterizadas. A expressão dos genes que codificam estas
enzimas ao longo do ciclo de vida do parasita na presença e ausência de fármaco foi
efectuada por RT-PCR.Anticorpos policlonais obtidos a partir de ratinhos foram
utilizados para a deteção da abundancia das proteínas ao longo do ciclo de vida do
parasita. Utilizou-se ainda a tecnica de transfeção com o objectivo de criar uma linha
knockout para determinar se estas proteínas são essências para o parasita. Proteínas
recombinantes foram expressas em células de
E.coli
e actividade enzimática das
mesmas foi testada usando um substrato específico para as DUBs. O inibidor das
DUBs com actividade antimalarica, curcumina foi usado quer
in vitro
para testar a sua
actividade sobre as proteínas recombinantes, mas também
in vivo
no modelo de
malaria roedora de
Plasmodium chabaudi
em associação com cloroquina e
artemisinina.Umensiao de proteomica foi também usado para ver que proteínas estão
alteradas em resposta ao tratamento com curcumina.
Os resultados demonstram que em
P. falciparum
os genes
pfuch-l1
,
pfuch-l3
,
pfuch
-
l54
e
pfubp-8
são diferencialmente expressos ao longo do ciclo de vida do parasita e
as respectivas proteínas são mais abundantes no estadio de trofozoito e esquizonte. O
tratamento dos parasitas com artemisinina, cloroquina, curcumina induziu um aumento
temporário na expressão dos genes seguido de um declínio. Não foi possível obter
uma linha parasitária knockout
pfuch-l1
e
pfuch-l3
viável. As proteínas recombinantes
foram expressas com sucesso em células de
E. coli
excepto a
Pfuch
-
l54
. As
Pfuch-l1
,
Pfuch-l3
,
Pfubp-8
demonstraram actividade enzimática e interagiram com o susbstrato
Ub-AMC. Os IC50 da curcumina nas proteínas recombinantes foram:
Pfuch-l1
15μM,
Pfuch-l3
25.4μM,
Pfubp-8
10μM e para a proteina recombinante humana USP2, 5μM.
A Curcumina quando testada nas células HepG2 apresenta alguma toxicidade
in vitro
,
mas não apresenta uma alta toxicicidade em ratinhos e quando utilizada em
associação com a cloroquina apresenta um efeito de sinergismo.Enquanto a