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de MDR-EPs, e pela determinação da concentração mínima inibitória para
substratos de MDR-EPs na presença/ausência de inibidores de efluxo. A
informação obtida foi complementada pela análise por RT-qPCR da expressão
de genes que codificam para as principais MDR-EPs de
S. aureus
e seus
reguladores e pesquisa de mutações associadas aos principais fenótipos de
resistência estudados.
A relevância de NorA para a resistência aos compostos antimicrobianos foi
analisada através da resposta de
S. aureus
ao
stress
imposto pelo EtBr.
Demonstrou-se que a presença/ausência deste composto promove o
aumento/decréscimo da expressão do gene
norA
com consequente
redução/aumento da susceptibilidade a fluoroquinolonas, biocidas e corantes.
Foram também analisados os alelos de
norA
dos isolados clínicos, tendo sido
verificada a predominância do alelo
norAI
. Estes estudos evidenciaram a
complexidade da regulação deste sistema, com a identificação de múltiplos
factores que contribuem para a modelação da expressão de
norA
e actividade
de NorA.
Em relação às bombas codificadas em plasmídeos, verificou-se que tanto
QacA, codificada num plasmídeo associado à multirresistência, como Smr,
codificada num plasmídeo sem genes de resistência adicionais, desempenham
um papel importante na resistência a biocidas, podendo contribuir para a
persistência e disseminação em ambiente hospitalar de estirpes resistentes a
biocidas e potencialmente resistentes a antibióticos.
A caracterização global dos isolados de
S. aureus
de origem clínica revelou
uma contribuição significativa do efluxo para a resistência aos compostos
antimicrobianos, com a identificação de um grupo de isolados com actividade
de efluxo aumentada e correlacionável com susceptibilidade reduzida a
fluoroquinolones e biocidas. A incubação com inibidores de efluxo, em
particular as fenotiazinas, promoveu uma redução dos níveis de resistência,
sem contudo resultar na reversão do fenótipo de resistência. Os estudos de
expressão génica não revelaram uma correlação directa entre maior actividade
de efluxo e expressão génica, sugerindo que os isolados clínicos podem já
estar adaptados para uma resposta por efluxo na presença de compostos
nocivos. Observou-se ainda uma multiplicidade de respostas mediadas por
efluxo aos diferentes substratos e suas concentrações, variáveis no padrão
temporal de expressão génica, níveis de expressão e genes envolvidos.
Os resultados obtidos evidenciam que o efluxo constitui parte da resposta
inicial da célula aos compostos antimicrobianos, a qual, no caso das
fluoroquinolonas, é seguida pela aquisição de mutações nos genes alvo.
Mostrou-se ainda que a pressão exercida por biocidas induz a resistência
cruzada a fluoroquinolonas.
Em resumo, os resultados descritos nesta Dissertação demonstram a
contribuição do efluxo para a emergência de resistência a fluoroquinolonas e
outros compostos antimicrobianos e o seu papel na emergência de estirpes de
S. aureus
multirresistentes em ambiente hospitalar.