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educacionais de acordo com a realidade e situação de saúde da população
local; fortalecer a capacidade das escolas em termos de infra-estrutura e
recursos humanos e materiais; melhorar as competências do pessoal existente;
utilizar cenários de prática e metodologias pedagógicas comprovadamente
eficazes;
revisar e actualizar os currículos em uma base regular; assegurar que
as reformas educacionais sejam relevantes e implementadas
de forma gradual
com o engajamento de todos os interessados; o suporte necessário e com o
devido monitoramento e avaliação
; estabelecer um ambiente educativo que
promova e premie a excelência educacional a inovação e a qualidade no
ensino.
SILVA, Renato Fernandes Pinheiro da (2015) Funcional analysis of
genes differentially expressed in salivar glands of
Anopheles
coluzzii
and
Anopheles
stephensi
in response to infection by
Plasmodium berghei
. Dissertação de Doutoramentono ramo de
Ciências Biomédicas, especialidade de Biologia Celular e
Molecular. IHMT. Lisboa.
A malária é uma doença infecciosa devastadora causada por parasitas do
género
Plasmodium
transmitida através da picada de mosquitos
Anopheles
infectados. As glândulas salivares são os únicos tecidos do mosquito invadidos
por esporozoitos de
Plasmodium
, sendo um ponto-chave para a transmissão
do parasita tornando o estudo do sialoma de
Anopheles
altamente relevante.
No presente estudo, a sequenciação directa de RNA (RNA-Seq) foi utilizado
para comparar a expressão diferencial de genes em glândulas salivares de
Anopheles coluzzii
e
Anopheles stephensi
infectados por
Plasmodium berghei
.
Para o
Anopheles coluzzii
, 1578 genes sobreexpressos e 1010 genes
subexpressos foram encontrados nos mosquitos infectados quando
comparados com os controlos não-infectados, sendo que as classes funcionais
de genes metabolismo, imunidade, replicação/transcrição/tradução, proteólise e
transporte foram as mais afectadas pela infecção pelo parasita. Os resultados
obtidos para
Anopheles stephensi
mostraram 1996 genes sobreexpressos e
540 genes subexpressos sob as mesmas condições sendo metabolismo
replicação/transcrição/tradução, função celular e transporte as classes
funcionais mais representadas. Os resultados obtidos por RNA-Seq foram
validados por quantificação relativa por PCR em tempo real. Com base nas
suas funções putativas e nos níveis de expressão, o gene que codifica uma
proteína transmembranar, transportadora de glucose,
AGAP007752
de
Anopheles coluzzii
foi seleccionado para análise funcional por RNA de
interferência. De igual modo foi seleccionado o gene
ASTE0009391
de
Anopheles stephensi
, também conhecido como
prestin
, que codifica para uma
proteína transmembranar, transportadora de solutos. Os resultados
demonstraram que o número de esporozoítos foi significativamente reduzido
quando o gene
AGAP007752
(p<0.01) foi silenciado mas este resultado não se
verificou quando o gene
prestin
foi silenciado. Para a produção de anticorpos
monoclonais, utilizou-se como antigénio um péptido correspondente ao maior
segmento extracelular da proteína AGAP007752. Após fusão celular foram
obtidos hidridomas e, posteriormente clones que apresentaram títulos elevados
quando comparados com o controlo. A especificidade dos anticorpos foi
testada por
Western Blotting
. Realizaram-se ensaios de imunolocalização para