18 / 124
18
convencional não diferencia rotineiramente as espécies do MTC. Foi
desenvolvido um algoritmo de identificação rápido e robusto, baseado em PCR
em tempo real, dirigido para cinco alvos genómicos para a identificação das
espécies do MTC vulgarmente associadas à tuberculose nos bovinos e outros
animais. O primeiro passo permite a confirmação dos membros do MTC nas
culturas, através da detecção da IS
6110
, ou como uma espécie
micobacteriana, pela presença do 16S rDNA. Se uma espécie do MTC for
identificada, o segundo passo do algoritmo permite avaliar a presença ou
ausência das regiões genómicas RD1, RD4 e RD9. O padrão correspondente
permite inferir a espécie do isolado como
M. tuberculosis
(se todas as RDs
estiverem presentes),
M. caprae
(se apenas a RD1 e RD4 estiverem presentes)
ou
M. bovis
(se apenas a RD1 estiver presente). O algoritmo de identificação
desenvolvido demonstrou um coeficiente
kappa
de 0,970 com o resultado da
análise bacteriológica. O ensaio pode ser implementado em laboratórios de
diagnóstico veterinário, especialmente em laboratórios de referência.
Tem-se registado uma procura crescente por métodos de diagnóstico de
doenças infecciosas rápidos, de fácil utilização e acessíveis, passíveis de
serem utilizados em pontos-de-decisão. A detecção dos membros do MTC é
geralmente realizada por diversos métodos convencionais baseados na cultura,
que normalmente necessitam de oito semanas. Foram também desenvolvidas
estratégias de diagnóstico molecular, mas a maioria requer operadores
qualificados e equipamentos e infra-estruturas sofisticadas. Recentemente, a
técnica de
Loop-Mediated Isothermal Amplification
(LAMP) mostrou-se
promissora para o desenvolvimento de testes rápidos, de baixo custo,
sensíveis e específicos para a detecção de agentes patogénicos. Neste
trabalho, foram optimizados dois sistemas LAMP em formato
duplex
(dLAMP)
para a identificação do MTC e
Mycobacterium tuberculosis
, e do MTC e
M.
bovis
, apresentando valores de sensibilidade e especificidade comparáveis a
outras abordagens em que se utiliza o PCR convencional. Os resultados das
amplificações são avaliados colorimetricamente utilizando dispositivos de fluxo
lateral, simples e comercialmente disponíveis, para a detecção de ácidos
nucleicos (NALF).
Os resultados apresentados nesta dissertação contribuem para a melhoria das
estratégias de diagnóstico molecular existentes no combate à tuberculose
animal.
COSTA, Sofia Maria Mourão Marques dos Santos (2014) Efflux
pump activity in drug resistance of Staphylococcus aureus.
Dissertação de Doutoramento no ramo de Ciências Biomédicas,
especialidade de Microbiologia. IHMT. Lisboa.
Resumo:
Staphylococcus aureus
é um importante agente patogénico, para o
qual estão descritos vários mecanismos de resistência a compostos
antimicrobianos, sendo a resistência mediada por bombas de efluxo (MDR-EP)
o menos bem caracterizado. Foi objectivo desta Dissertação avaliar a
contribuição global destes sistemas de efluxo, em particular, de NorA, Smr e
QacA, para a resistência a fluoroquinolonas e a outros compostos
antimicrobianos em
S. aureus
.
Foi estudada uma colecção de isolados clínicos de
S. aureus
resistentes à
ciprofloxacina e estirpes de referência. A actividade de efluxo foi avaliada por
metodologias baseadas no transporte de brometo de etídeo (EtBr), substrato