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Os mesmos multímeros foram observados para S-HDAg presente em
partículas virais sugerindo que a multimerização do antigénio ocorre
in vivo
.
Finalmente, estudamos a capacidade do S-HDAg interagir com ácidos
nucleicos. Verificamos que multímeros e monómeros de S-HDAg são capazes
de interagir
in vitro
com RNA e DNA. A falta de especificidade observada pode
dever-se apenas a interacções electrostáticas entre o S-HDAg de carga
positiva (+12) e ácidos nucleicos de carga negativa. Propomos que,
in vivo,
a
fosforilação extensiva do S-HDAg reduza a carga positiva contribuindo para
que a interacção seja específica para os RNAs virais.
ANTUNES, Sandra Isabel da Conceição (2013) Differential
expression and functional characterization of cattle tick genes in
response to pathogen infeccion (
Babesia bigémina
), Dissertação
de Doutoramento no ramo de Ciências Biomédicas, especialidade
de Parasitologia. IHMT. Lisboa.
Resumo: O conceito “
One health
” reconhece a necessidade do trabalho
conjunto de veterinários, profissionais de saúde e cientistas, dada a interface
dinâmica entre pessoas, animais e ambiente. Este conceito é muito importante
em zoonoses, tais como doenças associadas a carraças (DAC´s) que
dependem de animais como reservatório. Os protozoários do género
Babesia
são agentes patogénicos transmitidos por carraças que causam a doença
denominada babesiose num variado número de animais incluindo o Homem.
Particularmente a
B. bovis
e
B. bigemina
são transmitidas por carraças,
relacionadas com gado,
Rhipicephalus (Boophilus) annulatus
e
R. microplus
sendo estas consideradas os ectoparasitas de maior importância, com largo
impacto económico na produção animal. O uso tradicional de acaricidas no
controlo de carraças apresenta diversas desvantagens incluindo a seleção de
carraças acaricido-resistentes e contaminação ambiental com resíduos
químicos. As vacinas destacam-se como uma alternativa ao uso de acaricidas.
O objetivo destas vacinas é a proteção contra DAC´s através do controlo das
infestações pelos vectores e redução de transmissão de doença. As proteínas
envolvidas nas interações carraça-agente patogénico podem ser bons
candidatos para essas novas vacinas mas a sua identificação e validação
continuam a ser obstáculos. Os objetivos do presente estudo foram, primeiro, a
identificação de genes de
R. annulatus
diferenciadamente expressos em
resposta à infeção por
B. bigemina
, segundo, a validação da influência destes
genes no processo de infeção e finalmente a caracterização dos antigénios
identificados, a fim de selecionar os melhores candidatos, para o
desenvolvimento de uma potencial nova vacina. A fim de alcançar os objectivos
propostos, clones de uma biblioteca de hibridização subtrativa por supressão
(SSH) foram sequenciados e analisados. Os genes diferenciadamente
expressos com prováveis funções relacionadas com a interface carraça- agente
patogénico, foram selecionadas para validação dos resultados de SSH por real
time RT-PCR. A análise funcional conduzida por RNA de interferência mostra
que, nas condições do presente estudo, o silenciamento dos genes que
codificam para as proteínas, sérica amilóide A e TROSPA levam á redução de
níveis de infecção em
R. annulatus
e em
R. microplus
em comparação com o
grupo controlo. Em
R. microplus
é demonstrada a influência também da
calreticulina (CRT). As proteínas TROSPA e CRT foram selecionadas e obtidas
usando um sistema de expressão em
Escherichia coli
e anticorpos