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anticorpo que reconhece especificamente esta cinase em diferentes extratos
celulares de
T. brucei
, não foi possível usar o mesmo em estudos de
localisação por fluorescência e os ensaios de neutralização/proteção não foram
feitos devido a limitações de tempo.
Um projeto alternativo desenvolvido tinha como objetivo identificar possíveis
proteínas reguladoras. Como tal, extratos de citoesqueleto foram obtidos em
células sincronizadas em mitose e citocinese, e usados para geração de
anticorpos monoclonais. Um total de 28 anticorpos foram selecionados. Apesar
de não mostrarem especificidade contra uma fase específica do ciclo celular,
produziram-se anticorpos com imunolocalisações muito interessantes. Além
disso, estes anticorpos poderiam num futuro ser usados como ferramentas
valiosas para estudar diferentes processos biológicas em
T. brucei
.
MACHADO, Patrícia Isabel Pires (2013) Pyruvate kinase and
glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiencies and their
association with malaria: population genetics and proteomic
studies, Dissertação de Doutoramento no ramo de Ciências
Biomédicas, especialidade Parasitologia. IHMT. Lisboa.
Resumo: A malária é reconhecida como uma das principais forças selectivas a
actuar na história recente no genoma humano. Inúmeros polimorfismos
genéticos têm sido descritos como protectores contra a gravidade da malária,
como o alelo HbS (designado de traço falciforme) e o alelo G6PD A- (associado
à deficiência de G6PD). Mais recentemente, também a deficiência de PK foi
associada com a protecção contra a malária. Evidências desta associação
foram obtidas em estudos com modelos de roedor e estudos
in vitro
utilizando
GV humanos deficientes em PK. Até à data, não foram obtidos dados em
populações humanas que revelem esta associação: ainda não foi identificada
uma variante de PK com uma prevalência elevada em regiões endémicas de
malária e não foram identificadas marcas de selecção na região do gene que
codifica para a PK (gene
PKLR
). Além disso, os mecanismos subjacentes à
protecção contra a malária por deficiências enzimáticas dos GV não estão bem
esclarecidos.
Assim, os objectivos do presente estudo foram: investigar os polimorfismos
genéticos humanos com associação com a malária em Cabo Verde; pesquisar
marcas de selecção da malária na região do gene
PKLR
em populações
Africanas; determinar a frequência da deficiência em PK e identificar uma
eventual variante da enzima que possa estar sob selecção positiva em regiões
endémicas de malária; avaliar o efeito das duas deficiências enzimáticas (PK e
G6PD) na invasão e maturação do parasita em culturas
in vitro
de
Plasmodium
usando GV normais e deficientes; e analisar o perfil proteómico de GV
infectados e não infectados, normais e com deficiência (em PK e G6PD), bem
como de parasitas isolados de GV tanto deficientes como normais.
Em Cabo Verde (área epidémica), não foram identificadas marcas de selecção
pela malária, através da análise dos vários polimorfismos. No entanto, quando
a análise foi realizada em dois países endémicos (Angola e Moçambique),
foram detectadas várias marcas de selecção: a genotipagem de microssatélites
(STRs) e polimorfismos de base única (SNPs) localizados na vizinhança do
gene
PKLR
revelou uma diferenciação consideravelmente maior entre as