155 / 201
COPETO, Sandra Ferreira (2010) Contribuição para o Diagnóstico
Molecular das Onicomicoses, Dissertação de Mestrado em Ciências
Biomédicas, IHMT, Lisboa.
Resumo: (não copiável)
COSTA, Susana Santos (2010) Caracterização preliminar da
Bioenergética do Efluxo pelo sistema AcrAB-To1C em
Escherichia coli,
Dissertação de Mestrado em Microbiologia Médica, IHMT, Lisboa
Resumo:
A resistência aos antibióticos em bactérias Gram-negativas pode ser
aumentada pela extrusão de antibióticos através de sistemas de efluxo. Em
Escherichia coli
, o principal
sistema de efluxo é o AcrAB-TolC o qual tem como principal fonte energética a força
proto-motriz. Este trabalho pretendeu estudar alguns aspectos essenciais da
bioenergética na actividade de efluxo de
E. coli
usando três estirpes bem
caracterizadas genotipica e fenotipicamente. Foi utilizado um método fluorimétrico
semi-automático no qual a fluorescência do fluorocromo brometo de etídeo,
substrato de bombas de efluxo foi seguida, permitindo a medição em tempo real da
actividade de efluxo e acumulação de fluorocromo (inibição do efluxo). A utilização
de brometo de etídeo é particularmente vantajosa pois emite baixa fluorescência no
exterior da célula bacteriana tornando-se extremamente fluorescente no seu interior.
Este método é uma nova aplicação do termociclador em tempo real RotorGeneTM
3000 que permite o cálculo da cinética de transporte reflectindo o balanço entre
acumulação de substrato por difusão passiva através da membrana e a sua
extrusão/efluxo, proporcionando uma detecção rápida e económica de inibidores de
efluxo.
Os resultados obtidos mostram, para todas as estirpes, que a GLU e o pH afectam a
acumulação e o efluxo do brometo de etídeo. De todos os inibidores de vias
biossintéticas testados, o ortovanadato de sódio, foi o que demonstrou maior
actividade inibitória, a qual é revertida na presença de GLU. Em conclusão, este
estudo mostra que a actividade de efluxo de
E. coli
depende não só da fosforilação
oxidativa por via da força proto-motriz mas também da energia proveniente da
hidrólise de ATP pelas ATPases. O ortovanadato de sódio tem potencial para ser
um novo inibidor de bombas de efluxo de largo espectro. A tecnologia utilizada
neste trabalho demonstrou ser apropriada para a caracterização bioenergética da
actividade de bombas de efluxo e permite a selecção de novos inibidores de
bombas de efluxo em bactérias.