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primeira identificação de um negevírus foi obtida de um lote de mosquitos da
espécie
Oc. caspius
, após o seu coisolamento com um flavivírus específico de
insetos OCFVPT. A génese dos efeitos citopáticos exuberantes e de
desenvolvimento rápido decorrentes da replicação destes vírus em culturas de
células de inseto, a sua origem e evolução desconhecidas, as semelhanças de
algumas das proteínas que codificam com as de vírus de plantas, e o seu potencial
impacto na
fitness
e/ou na eventual competência vetorial dos insetos em que são
encontrados, são questões que têm contribuído para o crescente interesse sobre o
estudo destes vírus.
No decurso do trabalho que aqui se apresenta foi efetuada a deteção, isolamento e
caracterização genética de novos negevírus de mosquitos colhidos no sul de
Portugal, tentativamente definida a sua gama de hospedeiros e analisada a sua
estratégia de replicação, usando células de inseto mantidas em cultura.
Através da utilização de RT-PCR e de
primers
degenerados (na sua maioria) foi
possível identificar novas estirpes de negevírus, presentes em quatro espécies de
mosquitos diferentes capturados no sul de Portugal:
Ochlerotatus caspius
,
Cx.
pipiens
,
Cx. theileri
e
Cx. univittatus
. Inferências filogenéticas baseadas no
alinhamento de sequências codificantes da polimerase viral, amplificadas de
negevírus isolados em culturas de células C6/36, demonstraram a ocorrência de um
novo grupo monofilético, filogeneticamente próximo do grupo monofilético do qual
constam negevírus de tipo Negev e pertencente ao grupo taxonómico proposto
recentemente,
Nelorpivirus
.
A análise da replicação de negevírus
in vitro
permitiu observar a presença de efeitos
citopáticos extensos e de desenvolvimento rápido, embora sem indicação óbvia da
entrada das células infetadas em apoptose. Estes vírus comprovaram replicar de
forma muito rápida, tendo sido possível detetar genomas virais no sobrenadante de
culturas celulares C6/36 infetadas, 4 horas após o início da infeção.
Neste trabalho foi também construído um vetor plasmídico, designado pIC111-V, o
qual deverá permitir a expressão transitória de proteínas em células de inseto como
consequência da presença de um promotor de transcrição de baculovírus
reconhecido constitutivamente nestas células. A sua utilização na transfeção de
células de inseto revelou poder representar um passo importante na melhoria das
metodologias de análise proteómica nestas células.
CASINHAS, José Miguel Fonseca Casinhas (2015) Biochemical study of
Polynucleotide Phosphorylase from the foodborne pathogen
Campylobacter jejuni
Dissertação de Mestrado em Microbiologia
Médica , IHMT, Lisboa.
As bactérias devem adaptar-se e responder rapidamente a diferentes condições
ambientais. As ribonucleases são as enzimas responsáveis pela maturação e
degradação de moléculas de RNA, permitindo uma rápida adaptação dos níveis de
RNA a diferentes ambientes. Esta adaptação é crucial para as bactérias
patogénicas invadirem e estabelecerem-se dentro do hospedeiro.