Anais 2015 - 3º Congresso Nacional de Medicina Tropical - 1º Congresso Lusófono de doenças transmitidas por vetores

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Teste de Diagnóstico Rápido
usando a tecnologia lab-on-paper
Para o desenvolvimento do teste de diagnóstico rápido foi
necessário otimizar o volume e a concentração de antigénio
recombinante PfHRP2 a adicionar à linha de teste, a dilui-
ção de anticorpo secundário (anti-IgG) a aplicar na linha de
controlo, assim como a quantidade (controlada pelo volume
de solução adicionado) de bionanoconjugados AuNP-MUA-
-anti-PfHRP2 ou AuNP-CALNN-anti-PfHRP2 a aplicar na
zona de deposição.
Aplicação dos bionanoconjugados noTDR
O volume de bionanoconjugados AuNP-MUA-anti-PfHRP2
ou AuNP-CALNN-anti-PfHRP2 a 12 nM variou entre 30 e
70 µl, de modo a determinar o volume necessário a ser apli-
cado na zona de deposição dos bionanoconjugados e a sua
capacidade de migração ao longo do teste. Observou-se que
60 µl é o volume ideal a ser aplicado para que os bionano-
conjugados migrem ao longo da tira de papel de filtro, e re-
conheçam o antigénio e o anticorpo secundário imobilizados
na linha de teste e de controlo, respetivamente.
Otimização da linha de teste
A concentração de antigénio recombinante PfHRP2 foi ava-
liada num intervalo de 0,6 a 1,5 mg/mL. Verificou-se que
somente com a concentração mais alta, correspondente a
1,5 mg/mL é que foi possível detetar uma cor vermelha
visível na linha de teste. Este resultado indica que ocorreu
ligação entre o antigénio imobilizado na linha de teste e o
anticorpo anti-PfHRP2 conjugado com as AuNP funciona-
lizadas (com CALNN ou MUA) que migraram ao longo da
tira de papel de filtro.
Também foi variado o volume de solução de antigénio re-
combinante PfHRP2 a imobilizar na linha de teste num in-
tervalo de 2 a 6 µl. Os resultados obtidos mostraram que 2,5
µl é o volume ideal a ser aplicado, uma vez que volumes de
antigénio superiores a este tornam-se excessivos para a ca-
pacidade de absorção do papel de filtro na linha de
sim, verificou-se que o volume de 2,5 µl de antigénio a uma
concentração de 1,5 mg/mL são as condições favoráveis a
serem aplicadas de modo a que o antigénio seja detetado, tal
como ilustra a figura 6.
Otimização da linha de controlo
Na linha de controlo foram aplicados 2,5 µl de anticorpo
secundário (anti-IgG) numa gama de diluições até 1:100
para os bionanoconjugados AuNP-MUA-anti-PfHRP2 ou
1:200 no caso de bionanoconjugados AuNP-CALNN-anti-
-PfHRP2. O volume aplicado de 2,5 µl foi selecionado de
acordo com os resultados obtidos na linha de teste.
Na presença de bionanoconjugados AuNP-CALNN-anti-
-PfHRP2, a linha de controlo apresentou uma cor vermelha
visível até uma diluição de anti-IgG de 1:90. A partir desta
diluição, a linha de controlo ainda é detetada, embora com
menor nitidez, deixando de o ser em presença de diluições
superiores (1:200), tal como ilustrado na figura 7 A. Nos
bionanoconjugados AuNP-MUA-anti-PfHRP2 uma cor ver-
melha visível está presente até à diluição de 1:45, não sendo
detetáveis diluições de anticorpo secundário superiores (Fi-
gura 7 B).
A partir dos resultados obtidos foi selecionada para o desen-
volvimento do TDR a diluição de anti-IgG de 1:90 e 1:45
em presença dos bionanoconjugados AuNP-CALNN-anti-
-PfHRP2 e AuNP-MUA-anti-PfHRP2, respetivamente.
Uma maior diluição foi conseguida na presença das nano-
partículas funcionalizadas com CALNN comparativamente
Figura 6 – Deteção do antigénio recombinante PfHRP2 em tira
de papel de filtro. Aplicação de 2,5 µl de antigénio a 1,5 mg/
mL e 60 µl de bionanoconjugados AuNP-CALNN-anti-PfHRP2
a 12 nM.
Figura 7 – Diluições de anticorpo secundário (anti-IgG) aplicadas na linha de controlo das
tiras de papel de filtro. (A) Diluições de anti-IgG aplicadas na linha de controlo em presen-
ça de 60 µl de bionanoconjugados AuNP-CALNN-anti-PfHRP2 a 12 nM; (B) Diluições de
anti-IgG aplicadas na linha de controlo em presença de 60 µl de bionanoconjugados AuNP-
-MUA-anti-PfHRP2 a 12 nM.
Artigo Original