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Como resultados, obtiveram-se 45
pools,
4 delas positivas com uma urina positiva
em cada
pool
, sendo a prevalência deste rastreio 0,44%. Esta metodologia
confirmou a sua utilidade para um rastreio universal de infeção congénita por CMV,
no entanto verificaram-se dificuldades na aplicação da mesma, o que deverá ser
tomado em consideração na implementação de um eventual programa de rastreio.
Os resultados obtidos na extração de urina CMV positiva através de fraldas de
recém-nascidos foram muito promissores, o que abre a possibilidade da sua
utilização para o diagnóstico da infeção congénita.
NASCIMENTO, Marta Maria Almeida Dias do, (2016) Desenvolvimento
e optimização da técnica Lamp
(LOOP-Mediated isothermal DNA
amplification)
para a identificação das principais genoespécies do
complexo
Borrelia burgdorferi sensu lato
. Dissertação de Mestrado em
Microbiologia Médica, IHMT, Lisboa.
A Borreliose de Lyme é uma infeção causada por bactérias (espiroquetas),
pertencentes ao complexo
Borrelia burgdorferi
sensu lato, que são transmitidas por
mordedura de carraças principalmente do género
Ixodes.
As espécies mais
prevalentes na Europa são
B. burgdorferi
sensu stricto,
B. garinii, B. afzelii, B.
valaisiana
e
B. lusitaniae.
A doença pode afetar diversos órgãos e sistemas de
acordo com o tropismo de cada espécie (da pele às manifestações neurológicas). O
diagnóstico laboratorial é difícil, sendo necessário desenvolver/implementar novos
testes que sejam sensíveis, rápidos e baratos.
O principal objetivo deste trabalho foi desenvolver uma técnica de amplificação
molecular isotérmica,
Loop-Mediated Amplification
– LAMP, em duplex, para
deteção e identificação de quatro das referidas espécies de
Borrelia
, tendo como
alvo o gene
flaB
, codificante da proteína flagelina.
Foi desenhado um conjunto de
primers
para cada espécie de
Borrelia,
com 100% de
especificidade. Para a otimização das condições de amplificação de DNA pela
técnica LAMP, foram escolhidos os
primers
para
B. lusitaniae
. Foram também
realizadas reações
nested-
PCR para o espaço intergénico 5S(
rrf
)-23S(
rrl
) e gene
flaB
e ainda qPCR para este último gene. Após a otimização a técnica foi aplicada a
carraças e a amostras humanas (soro e líquor) para deteção/identificação de
Borrelia
.
A amplificação de DNA, mostrou valores diferentes de sensibilidade consoante as
espécies, de 2,5pg/μl a 2500pg/μl de DNA para
B. lusitaniae
e
B. garinii
respetivamente e os resultados obtidos com as reações de
nested-
PCR e qPCR
variaram de 0,05 a 5pg/μl.
A exatidão da técnica LAMP para
B. lusitaniae
quando comparada com as outras
técnicas moleculares foi semelhante, pelo que se admite que com
primers
desenhados para o género
Borrelia
, ter-se-ia obtido melhor sensibilidade para todas
as espécies, com a vantagem da reação ocorrer num único tubo em menos de uma
hora, com visualização do resultado a olho nu.