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xenobióticos atribuída às proteínas da sub-família ABCC. Pelo contrário, o
padrão de expressão do gene
pfmrp2
, foi compatível com uma função de
importação (de ex. glutatião). Este resultado é discutível.
Os perfis de expressão dos referidos 10 genes, indicam que a presença de CQ
(dose IC50), altera significativamente a expressão no sentido do aumento de
expressão (indução). Mais, a amplitude de variação de expressão dos genes é
significativamente mais elevada no clone 3D7 (sensível) do que no Dd2
(resistente). Em geral não foi verificada diminuição (repressão) significativa da
expressão dos genes em presença de CQ para as doses utilizadas (IC50). Os
resultados dos estudos de estabilidade do mRNA, sugerem que o efeito de
regulação da CQ se processa a nível transcripcional, e que a CQ não modifica
a velocidade de degradação do mRNA destes genes.
RODRIGUES, Ana Afonso (2007) Studies on the genetics of
artemisinin resistance in Malaria, Dissertação de Doutoramento
no ramo de Ciências Biomédicas, especialidade de Parasitologia.
IHMT. Lisboa.
Resumo:
A existência de estirpes de
Plasmodium falciparum
resistentes a
multiplos fármacos é um dos problemas mais graves no controlo da malária.
Novos fármacos, como a artemisinina (ART) e seus derivados são cada vez
mais utilizados no tratamento da malaria e muito embora até ao momento não
haja registos de fármaco-resistência estável à ART o seu surgimento seria
desastroso devido á falta de alternativas.
A investigação apresentada nesta tese descreve a selecção de resistência
estável à ART e ao artesunato (ATN) utilizando um modelo roedor de malária, o
parasita
Plasmodium chabaudi chabaudi
(
Plasmodium chabaudi
). Dois clones
de
Plasmodium chabaudi
diferentes, AS-15CQ e AS-30CQ, foram inoculados
em murganhos que por sua vez foram tratados na presença de concentrações
sucessivamente crescentes de ATN e ART, sendo que no final do processo de
seleção de resistência, os parasitas obtidos apresentavam uma resistência de
6 e 15 vezes superior ao ATN e à ART, respectivamente, em relação aos
parasitas iniciais. Os clones obtidos foram nomeados respectivamente AS-ATN
(obtido a partir de AS-15CQ por seleção com pressão de ATN) e AS-ART
(obtido a partir de AS-30CQ por seleção com pressão de ART). A resistência
obtida durante o processo de seleção é estável após clonagem,
congelamento/descongelamento, passagem sanguínea na ausência de
pressão de fármaco e transmissão natural através do mosquito vector.
A sequência nucleotídica e o número de cópias dos genes previamente
descritos na literatura como moduladores putativos de resistência à ART e seus
derivados:
mdr1, cg10, tctp
e
atp6
; foi comparada entre parasitas resistentes e
sensíveis, não tendo sido encontradas nenhumas alterações, quer na
sequência quer no número de cópias destes genes. Posteriormente, numa
tentativa de identificar os genes envolvidos na resistância à ART e ao ATN a
técnica de
Linkage Group Selection
(LGS) foi utilizada. Para tal dois
cruzamentos genéticos foram realizados. Estes cruzamentos foram realizados
entre os clones fármaco-resistentes; AS-ART e AS-ATN e um clone
geneticamente distinto dos anteriores e sensível aos fármacos em estudos, AJ.
Após realização do LGS quatro
loci
genéticos; nos cromossomas de
P.
chabaudi
1, 2, 6 e 8 foram encontrados associados à resistência. Atendendo a