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verificado um aumento dos casos de doença associada a
C. difficile
com sintomas
mais severos, elevadas taxas de morbilidade, mortalidade e recorrência, em parte,
devido à emergência de estirpes mais virulentas, mas também devido à má gestão
do uso de antibióticos.
C. difficile
produz duas toxinas, TcdA e TcdB, que são os
principais fatores de virulência e responsáveis pelos sintomas da doença. Estas são
codificadas a partir do Locus de Patogenicidade (PaLoc) que codifica ainda para um
regulador positivo, TcdR, uma holina, TcdE, e um regulador negativo, TcdC. Os
esporos resistentes ao oxigénio são essenciais para a transmissão do organismo e
recorrência da doença.
A expressão dos genes do PaLoc ocorre em células vegetativas, no final da fase de
crescimento exponencial, e em células em esporulação. Neste trabalho construímos
dois mutantes de eliminação em fase dos genes
tcdR
e
tcdE
. Mostrámos que a
auto-regulação do gene
tcdR
não é significativa. No entanto,
tcdR
é sempre
necessário para a expressão dos genes presentes no PaLoc.
Trabalho anterior mostrou que, com a exceção de
tcdC,
os demais genes do PaLoc
são expressos no pré-esporo. Mostrámos aqui que TcdA é detectada à superfície do
esporo maduro e que a eliminação do
tcdE
não influencia a acumulação de TcdA no
meio de cultura ou em associação às células ou ao esporo. Estas observações têm
consequências para o nosso entendimento do processo infecioso: sugeremque o
esporo possa ser também um veículo para a entrega da toxina nos estágios iniciais
da infecção, que TcdA possa ser libertada durante a germinação do esporo, e que o
esporo possa utilizar o mesmo receptor reconhecido por TcdA para a ligação à
mucosa do cólon.
RIBEIRO, Marta Maria Ramos Soares (2015) Aplicação de anticorpos
recombinantes para o diagnóstico da pneumocistose, Dissertação de
Mestrado em Ciências Biomédicas, IHMT, Lisboa.
A pneumonia causada por
Pneumocystis
, conhecida por pneumocistose, ou PPc, é
uma doença de alto relevo e preocupação a nível de saúde pública. O seu rápido
diagnóstico é de grande importância, visto ser uma doença fatal em indivíduos com
imunossupressão. Como tal, é imprescindível a continuação da pesquisa de novas
abordagens de diagnóstico rápido para esta doença. A aplicação de anticorpos
recombinantes adquiridos pela técnica de
Phage display
pode ser uma grande mais
valia, não só do ponto de vista de diagnóstico, não tendo de se recorrer a
kits
de
diagnóstico, como também terapêutico.
Este estudo teve por objetivo a produção de fragmentos de anticorpos
recombinantes com o auxílio da técnica de
Phage display
, para diagnóstico da
pneumocistose.
A fim de se pesquisar os anticorpos recombinantes monoclonais específicos para
P.
jirovecii
foram realizados três estudos. No primeiro e segundo estudos, a pesquisa
dos anticorpos recombinantes fez-se através de amostras biológicas aleatórias de
lavados broncoalveolares (LBA) de doentes com presença de
P. jirovecii.
Para o
terceiro estudo foi utilizada uma proteína recombinante purificada MsgC
-
glicoproteína
Major
de superfície (do inglês
, Major surface glycoprotein
) de
P.
jirovecii
, a qual é composta por três fragmentos de péptidos imunogénicos. Na
captura de fragmentos recombinantes anti-
P. jirovecii
, utilizaram-se no primeiro