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simulam a estrutura nativa das partículas virais. Neste trabalho pretendemos obter
um vector de expressão recombinante, capaz de induzir a síntese de VLPs de
CHIKV quando transfectado em culturas celulares, como fonte da sequência
codificante da poliproteína estrutural para clonagem em baculovírus e produção de
VLPs em células de insecto. A ORF estrutural de CHIKV foi amplificada por RT-PCR
como um fragmento SacI-NotI e clonada no vector de expressão pLEXm a jusante
do promotor forte da beta actina de galinha. Obtiveram-se vários clones com o
tamanho correcto do inserto, os quais foram usados para transfectar células HEK
293T usando polietilenimina como agente de fusão. A análise por
imunofluorescência indirecta (IF) e
Western blotting
(WB) de células transfectadas,
usando um soro policlonal anti-CHIKV, demonstrou que cinco vectores
recombinantes expressavam antigénios virais. Um clone apresentou níveis elevados
de fluorescência apenas quando da permeabilização celular e induz, muito
provavelmente, a síntese de uma glicoproteína E2 truncada (26 kDa) que não é
transportada até à membrana citoplasmática. Três clones deram origem a
intensidades de fluorescência relativamente fracas que poderão estar
correlacionadas com menor taxa de tradução e/ou processsamento incompleto. As
células transfectadas com pLCHIKS67 revelaram fluorescência e padrão proteico
em WB semelhante aos de células infectadas com CHIKV. Ainda, o seu
sobrenandante de cultura quando precipitado com PEG 8000 revelou (WB) uma
composição de antigénios virais idêntica ao precipitado correspondente de células
infectadas com CHIKV. A análise por microscopia electrónica de transmissão de
células infectadas com CHIKV e de células transfectadas com pLCHIKS67
demonstrou a presença de VLPs nestas últimas, com dimensões e morfologia
idênticas às partículas virais, e ainda um extenso rearranjo de membranas
intracelulares, observado igualmente nas células infectadas, o qual deverá estar
associado à tradução, processamento e transporte das proteínas estruturais. De
acordo com os resultados obtidos, pLCHIKS67 será uma boa fonte da sequência
nucleotídica da poliproteína estrutural para usar na geração de baculovírus
produtores de VPLs de CHIKV.
ABREU, Paulo José Alves (2011) Transição de saúde e nutrição na Era
da globalização e da urbanização – Avaliação do perfil antropométrico
de crianças e adolescentes escolares e percepções das alterações
alimentares dos respectivos encarregados de educação, Ilha do Fogo,
Cabo Verde, Dissertação de Mestrado em Saúde e Desenvolvimento,
IHMT Lisboa
Resumo:
Nesta nova era da Globalização e da urbanização, em que as fronteiras
se abrem ao mundo, pessoas e bens circulam, costumes e tradições são