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de sequenciação). Como pode ser observado pela figura 1
o fragmento possui tamanho superior pelo que foi decidido
prosseguir para a expressão da proteína. Foi obtida a prote-
ína recombinante com o peso esperado de cerca de 46kDa
[26, 38] e purificada (figura 2 e 3).
A rCRT foi utilizada na imunização de murganhos Balb/c.
Foram realizadas 5 imunizações e a resposta imunogénica foi
seguida por ELISA (figura 4). O murganho com melhor tí-
tulo de anticorpo foi seleccionado e sacrificado para colheita
total do sangue.
Foi obtido cerca de 500 µl de soro policlonal que foi poste-
riormente utilizado nos ensaios de alimentação artificial de
carraças. Grupos de carraças fêmeas adultas foram recolhi-
dos de um vitelo livre de babesiose e alimentadas artificial-
mente (figura 5).
A tabela 1 sumariza os resultados obtidos relativamente aos
parâmetros associados ao processo de alimentação nos en-
saios de alimentação artificial. Como pode ser observado
houve um incremento de peso significativo em todos os gru-
pos sendo que a menor percentagem de incremento de peso
ocorreu no grupo alimentado com sangue infectado e soro
controlo e o maior aumento ocorreu no grupo alimentado
apenas com sangue infectado.
Estatisticamente não foram observadas diferenças significa-
tivas na % de incremento de peso entre o grupo alimentado
com sangue bovino e o grupo alimentado com sangue infec-
tado (P> 0,05) o que está de acordo com estudos anteriores
que relatam a inexistência de influência da infecção na inges-
tão de sangue em
R.microplus
[39, 40]. Sendo assim os grupos
poderão ser agrupados para analisar os parâmetros associa-
dos á alimentação. Comparando os 3 grupos verifica-se que
existem diferenças significativas entre os grupos (ANOVA
F=4.23 P=0.018). O grupo não exposto a anticorpos de
qualquer tipo tem um incremento de peso superior aos res-
tantes. Os grupos alimentados com soro (controlo e anti-
-CRT) não apresentam diferenças significativas na percenta-
gem de incremento de peso (teste
t
-student P> 0.05). Dadas
as funções associadas à proteína CRT que parece ser essen-
Tabela 1 -
Comparação do fragmento obtido por
PCR
com sequências nucleotídicas de CRT disponí-
veis na base de dados
Genbank
. Semelhança expressa em percentagem.
Fig. 4 -
Título do soro de cada murganho depois de 4 imunizações rCRT.A linha descontínua a preto repre-
senta o tripo do valor de D. O. do soro controlo.
Fig. 5 -
Alimentação artificial de
R. micro-
plus
. Fêmeas parcialmente alimentadas fo-
ram recuperadas manualmente de um vi-
telo, limpas, pesadas e fixas numa bandeja
de poliestireno com fita-cola de dupla face.
As carraças foram alimentadas por 28 horas
usando tubos capilares como exemplifica a
foto.
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