197 / 201
Este problema tem ganho particular visibilidade em Enterobacteríaceas,
assistindosea um aumento de infecções por estirpes de
Escherichia coli
multirresistentes.
Com este trabalho pretendem-se estudar os mecanismos fisiológicos deresistência
aos antibióticos em
E. coli
, com particular ênfase na detecção equantificação da
componente de efluxo nesta resistência.
Foram estudadas 8 estirpes clínicas de
E. coli
multirresistentes, isoladas noserviço
de Patologia Clínica do Hospital dos SAMS, de pacientes internados nestehospital
entre o último semestre de 2007 e o primeiro semestre de 2008. A presençade
actividade de bombas de efluxo nestas estirpes foi avaliada por: (1) Determinação
de concentrações mínimas inibitórias para a ciprofloxacina, trimetoprim e
gentamicina na presença/ausência de inibidores de bombas de efluxo (Carbonyl
cyanide m-chlorophenylhydrazone, phenylalanyl arginyl-β- naphthylamide,
verapamil, tioridazina e clorpromazina); (2) Detecção da possível sobre-expressão
de bombas de efluxo por aumento da extrusão de brometo de etídeo, um substrato
de bombas de efluxo, por métodos qualitativos em placa e quantitativos por
fluorimetria em tempo real, utilizando um termociclador em tempo real (Rotor-Gene
3000TM da Corbett). (3) Quantificação relativa dos níveis de expressão de mRNA
(qRT-PCR) dos genes
acrA
,
acrB
,
acrE
,
acrF
,
marA
,
yhiV
e
emrB
, codificantes e
reguladores de bombas de efluxo relacionadas com a resistência aos antibióticos
em
E. coli
.
Das 8 estirpes de
E. coli
testadas, 4 demonstraram possuir um efluxo aumentado de
brometo de etídeo, que é fortemente inibido pelos inibidores de bombas de efluxo
testados, tendo-se verificado concomitante reversão/redução da resistência aos
antibióticos nestas estirpes quando na presença de inibidores de bombas de efluxo.
A análise por qRT-PCR das 2 estirpes com maior actividade de efluxo, foi possível
verificar a sobre-expressão dos genes codificantes para as bombas de efluxo
estudados, destacando-se a sobre-expressão (50x aumentado) do principal sistema
de efluxo em
E.coli
, o sistema acrAB, numa das estirpes altamente resistente aos
antibióticos.
Igualmente foi possível caracterizar uma estirpe clínica de
E.coli
multirresistente
com actividade de efluxo aumentada devido à sobre expressão do sistema AcrEF.
Verificou-se que a sobre-expressão de bombas de efluxo é uma realidade nas
estirpes clínicas de
E. coli
, contribuindo significativamente para a multirresistência
aos antibióticos. A utilização de técnicas simples e rápidas com recurso a substratos
fluorescentes, poderá contribuir para detectar precocemente a resistência aos
antibióticos por sobre-expressão de bombas de efluxo. No futuro, o uso de
inibidores de bombas de efluxo como compostos adjuvantes da terapêutica poderá
vir a constituir uma opção clínica a considerar de forma a recuperar a actividade de
antibióticos em estirpes resistentes.